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高效液相色譜分析法(HPLC),它的基本概念及理論基礎(如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等),與氣相色譜是一致的,但又有不同之處。
高效液相色譜與氣相 色譜的主要區別可歸結于以下幾點:
(1) 進樣方式的不同:高效液相色譜只要將樣品制成溶液,而氣相色譜需加熱氣化或裂 解;
(2) 流動相的不同,在被測組分與流動相之間、流動相與固定相之間都存在著一定的相 互作用力;
(3) 由于液體的粘度較氣體大兩個數量級,使被測組分在液體流動相中的擴散系數比在 氣體流動相中約小4~5個數量級;
(4) 由于流動相的化學成分可進行廣泛選擇,并可配置成二元或多元體系,滿足梯度洗 脫的需要,因而提高了高效液相色譜的分辨率(柱效能);
(5) 高效液相色譜采用5~10Lm細顆粒固定相,使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小,流動阻力增大,必須借助高壓泵輸送流動相;
(6) 高效液相色譜是在液相中進行,對被測組分的檢測,通常采用靈敏的濕法光度檢測 器,例如,紫外光度檢測器、示差折光檢測器、熒光光度檢測器等;
(7) 液相色譜與氣相色譜相比較,高效液相色譜同樣具有高靈敏度、高效能和高速度的 特點。 高效液相色譜的定性和定量分析,與氣相色譜分析相似, 在定性分析中,采用保留值定性,或與其他定性能力強的儀器分析法連用;在定量分析中,采用測量峰面積的歸一化法、內標法或外標法等,但高效液相色譜在分離復雜組分式樣時,有些組分常不能出峰,因此歸一化法定量受到限制,而內標法定量則被廣泛使用。
根據物質的光譜來鑒別物質及確定它的化學組成和相對含量的方法叫光譜分析。其優點是靈敏,迅速.歷史上曾通過光譜分析發現了許多新元素,如銣,銫,氦等.根據分析原理光譜分析可分為發射光譜分析與吸收光譜分析二種;根據被測成分的形態可分為原子光譜分析與分子光譜分析。光譜分析的被測成分是原子的稱為原子光譜,被測成分是分子的則稱為分子光譜。